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Altogen Biosystems转染试剂的相关知识普及

2019-09-17      点击:68
  随着分子生物学和细胞生物学研究的不断深入,DNA转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规实验工具。质粒转染在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生命科学前沿研究中,应用越来越广泛。Altogen Biosystems转染试剂能够利用不同的载体物质携带质粒DNA,通过直接穿膜或膜融合的方法,将外源DNA分子导入真核细胞,使外源基因表达,从而针对某个基因和蛋白质的功能进行一系列生物学功能研究的方法。
  转染效率的确定,常用的是使用荧光定量PCR、荧光显微镜和流式细胞仪检测等方法。标准无疑是检测目标基因的mRNA水平,因为转染试剂不仅要把质粒DNA转染进入细胞,还应及时把转入细胞的DNA释放出来,发挥基因表达或基因调控的作用。通过荧光显微镜判断转染效率至少存在两方面的问题:1、荧光显微镜看到的荧光点可能是非特异吸附的结果;2、有些转染试剂能够将质粒DNA转染入细胞,但不能充分释放,导致基因表达或基因调控效率并不高。因而,判断Altogen Biosystems转染试剂转染效率的金标准应该是荧光定量检测mRNA水平,仅靠观察荧光显微镜判断转染效率、选择转染试剂往往会导致误判,影响实验的进展。
  质粒质量:请务必使用高质量转染级无内毒素质粒。通过260nm光吸收测定DNA浓度,260nm/280nm比值确定DNA纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。
  细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。
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