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什么是Neuromab 抗体的亲和力,如何进行测定?

2021-09-10      75
  Neuromab 抗体是由B细胞分泌的一类蛋白质,针对某种病原有免疫能力,故称之为抗体。而抗体亲和力是指抗体分子与抗原表位之间结合的强度,术语名称通常是解离常数KD。通常,抗原抗体分子之间亲和力包括离子键、氢键、疏水作用及范德华力等。
  
  抗原抗体的结合反应是一个可逆的反应,既有正相反应过程,即抗原和抗体结合反应生成抗原-抗体复合物的正反应过程,也有逆向反应,抗原-抗体复合物解离反应生成抗原、抗体的逆反应过程。
  
  目前,Neuromab 抗体亲和力测定方法根据检测原理分为热力学检测方法:等温滴定量热法、动力学检测方法动态平衡检测方法。下面,创亚化工小编将为大家分析等温滴定量热法和动态平衡测定法的基本原理。
  
  一、等温滴定量热法:
  
  等温滴定量热测定生物分子反应热,同时确定结合/解离平衡常数、反应化学量(n)、焓(ΔH)和熵(ΔS)。微量热仪中有两个池,参比池(水)和样品池。参比池和样品池被设定到所需的实验温度。将装有配体分子的滴定针插入包含目标蛋白的样品池中并逐渐滴定注入。
  
  当有配体与蛋白质结合,则可检测到被吸收或是被释放的热量变化。每一次滴定时,量热仪测量被释放或吸收的所有热量,直到结合反应达到平衡。测得的热量与结合量成正比。
  
  二、动态平衡测定法
  
  基于该原理的常用方法有ELISA,Cell-BasedELISA、流式细胞术(FACS)、均相时间分辨荧光(HTRF),在一定抗原存在情况下,将待测抗体进行梯度稀释,检测抗原-抗体复合物的浓度,当抗原-抗体复合物浓度站总抗原浓度一半时,此时,Neuromab 抗体的浓度值(EC50)即为KD值。
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