浅谈动物体内转染试剂的主要特点及操作步骤
2020-12-15 1036
动物体内转染试剂通过纳米技术合成，通过物理作用与核酸结合，浓缩包裹核酸，从而保护核酸免受免疫系统破坏，同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分，由于处于纳米尺度，粒径小，不易引起免疫反应，不影响动物和器官组织的功能，可以多次在同一动物注射。
于动物体内转染，可直接转染RNA到动物体内进行：
1、基因治疗的动物体内研究；
2、RNA干扰的动物体内研究；
3、蛋白功能的动物体内研究。
动物体内转染试剂主要特点：
1、3天可以得到结果，核酸+转染试剂，注射动物，完成转染。
2、肝、肾、心、肺，血液系统，神经系统，皮肤…成功应用。
3、可方便、快捷更换不同的小片断RNA进行动物试验。
4、方法先进，抛弃病毒，众多实验室应用，稳定可靠。
5、比使用病毒节省90%以上费用，时间缩短到3天。
动物体内转染试剂操作步骤：
1、传代细胞准备细胞在转染前24h传代,待细胞密度达50%～60%满底时即可进行转染。加入沉淀前3～4h，用9ml*培养液培养细胞。
2、DNA沉淀液的准备首先将质粒DNA用乙醇沉淀（10～50μg/10cm平板），空气中晾干沉淀，将DNA沉淀重悬于μL无菌水中，加50μL2.5mol/LCaCl2。
3、用吸管在500μL2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液，同时用另一吸管吹打溶液，直至DNA-CaCl2溶液滴完，整个过程需缓慢进行，至少需持续1～2min。
4、室温静置30min,出现细小颗粒沉淀。
5、将沉淀逐滴均匀加入10cm平板中，轻轻晃动。
6、在标准生长条件下培养细胞4～16h。除去培养液，用5ml1×HeBS洗细胞2次，加入10ml*培养液培养细胞。收集细胞或分入培养皿中选择培养。
