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转染试剂的作用原理是什么,有哪些转染方法?

2021-01-26      662
   转染试剂通过纳米技术合成,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分,由于处于纳米尺度,粒径小,不易引起免疫反应,不影响动物和器官组织的功能,可以多次在同一动物注射。
  
  随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展,转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中,其应用越来越广泛。转染试剂能做到高达90%的转染效率,转染时不需要去除血清,对细胞损伤较小,对贴壁细胞和悬浮细胞均适用。
  
  转染根据是否能把外源核酸整合到宿主染色体上分为瞬时转染和稳定转染。
  
  瞬时转染:外源性DNA/RNA不整合到宿主染色体中,因此一次宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但是通常只能维持几天,多用于启动子以及其他调控元件的分析。一般在24-96小时内分析结果。核酸类型比较广泛,质粒DNA、siRNA、miRNA、和mRNA都可进行瞬时转染。
  
  稳定转染:通过这种转染方式外源性DNA既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体存在。外源DNA整合到宿主染色体中概率很小,大约1/10000转染细胞能整合,通常需要通过转染试剂来做选择性标记,得到稳定转染的同源细胞系。稳定转染的核酸多为质粒DNA。
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